#文献分享# 新适配体发表时，建议提供哪些参数？这里有个最低标准

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推荐语

适配体领域发展了三十多年，的确依然还面临很多挑战，特别是关于实验重复性的问题。其实关于自然科学领域实验重复性问题的讨论，不是只有适配体领域存在，其它领域也一样，这里只分析适配体领域面临的问题。小编虽然是出自专业的适配体筛选团队，甚至靠此养家糊口，但本着客观、中立、实事求是的精神，还是要开展一下讨论。

适配体的可重复性问题目前是客观存在的。主要的原因有很多，小编认为还是因为我们对适配体的认识不足所致。适配体的结构解析非常困难，也缺乏便宜、简便、灵敏的结构变化监测手段，导致生物大分子“结构决定功能”这个原理很难在适配体上及时验证。另外，众多因素会影响适配体性能的发挥，譬如缓冲液组成、变复性程序、适配体合成时的纯度和纯化方法，使用时的环境等等。这些与适配体结构的柔性有关，由于结构生物学在解析核酸结构上依然存在瓶颈，所以，我们对适配体结构与功能关系的认识进步比较缓慢。因此，彻底掌控适配体还需要很多科学家的努力。在此背景下，我们共同制定一套“发表标准”，统一一下发表“口径”就显得尤为重要。这是小编今天着力向大家推荐这篇文章的原因。

这篇文章较全面的考虑了影响适配体性能的因素，建议发表时，澄清相关信息，这样有利于更好的普及适配体技术，让更多的实验能更好地重现。所以，这个标准的发表意义深远。遗憾的是，这篇2022年发表在《aptamers》上的文章极少有人知道。主要原因是，这个杂志没有被web of science、pubmed、scopus等平台收录，因此，直接检索很难发现这篇文章。这个期刊是开放获取期刊，可以免费获取全文：http://japtamers.co.uk/wp-content/uploads/2022/05/McKeague.pdf（或点击文末阅读原文跳转）

这篇文章的意义：除了倡导建立标准外，这里提出的参数也是我们筛选时需要考虑的因素。

前言

自 1990 年适配体领域开创性论文发表至今，已历经三十载发展。期间，适配体在众多学科领域展现出广泛应用潜力，其针对的靶标范畴从金属离子、小分子化合物，至蛋白质、多肽乃至完整生物体无所不包。与此同时，SELEX 技术及其变体不断推陈出新，适配体特异性与亲和性测量技术亦取得显著进展。然而，科研实践中适配体研究成果重现性欠佳问题凸显，追根溯源，关键在于缺乏标准化实验方案及完备发表规范。为扭转此困境，国际适配体协会旗下的适配体联盟精心制定MAPS指南，为适配体从筛选、鉴定到应用各关键环节的信息报道提供清晰指引，力求提升研究质量与重现性，推动适配体技术蓬勃发展。

适配体筛选的特点

关键参数众多

涵盖核酸库类型、随机区长度、引物结合位点及序列、折叠条件、金属离子浓度、缓冲液与 pH、靶标固定策略及浓度、温度、竞争剂使用、PCR循环数、聚合酶选择、产物分离条件、孵育时间温度、核酸与靶标摩尔比及分配条件等。cell-SELEX中细胞培养的稳定状态（增殖与形态特征监测）及支原体污染排除更是不可或缺，任何细微变动都可能改变筛选结果。

报告格式建议

构建系统详尽的表格，完整涵盖库信息（随机区、引物、核酸骨架修饰、合成量化及预处理细节）、缓冲体系（成分、pH、储存、特殊成分添加及相关原理）、靶标固定（方式、验证、浓度及技术考量）、分离条件（方法、缓冲液、孵育参数及优化依据）、负筛选（类型、时机及实验目的）、每轮库处理（单链生成、定量纯化技术流程）及 PCR 条件（酶、缓冲、引物、循环参数、样本处理分析及质量控制），以标准化格式精准传达筛选条件核心要点。

表 1. 用于报告所有相关选择条件的示例表。

表 2. 新 SELEX 实验每一轮的筛选条件

序列信息

测序与序列确定

传统克隆测序需广泛采集序列样本，深度挖掘富集基序线索，审慎抉择用于克隆测序的最终轮次，并清晰阐释停止筛选依据。适时展示各轮次结合测定数据，为筛选轮次决策提供坚实支撑，增强研究逻辑连贯性与可信度。NGS 技术凭借强大通量优势，可从筛选轮次中获取海量序列数据。在此背景下，需精细阐明序列筛选策略（平台选型、测序轮次确定、数据处理软件工具集、序列聚类逻辑、二级结构预测算法及参数），并于补充文件附录代表性序列集且严格核验准确性。条件允许时，原始数据应妥善存储于公共资源库或作为补充材料发布，确保数据资源可回溯、可共享，为全球科研协作奠定基础。

验证序列选择

详细说明后续验证序列的筛选准则，综合考量读数占比、多轮富集趋势、结构预测模型（二级或三维结构特征）及序列相似性排除等多元因素，精准锚定目标序列。同时，全方位呈现序列家族比对成果，深度挖掘保守与可变位点信息，为适配体结构-功能关联研究筑牢根基，解锁适配体设计优化新路径。

适配体序列的验证

前期验证要点

化学合成适配体须经质谱技术严格核验完整性，确保产品质量无虞。纯化方法选择（脱盐、HPLC、PAGE 等）应依据适配体特性与研究目标精准确定，并透明公开，为后续实验奠定纯净样本基础。实验缓冲条件若异于筛选阶段，应详细列示，充分考虑不同靶标特性差异，量身定制专属验证环境。乱序与点突变对照样本设置应严格遵循化学组成与长度一致性原则，适配体修饰特征亦应精准复现于对照序列，为特异性验证筑牢防线。定性定量实验应严格遵循重复原则，明确技术与生物学重复次数，确保结果稳定可靠、可重现。盲法操作应贯穿实验全程（含图像采集分析），规避主观预期干扰，确保数据真实反映实验本质。数据处理流程应详细记录（含结合亲和力与选择性计算方法），提升实验结果可解释性与可重复性。

表 3. SELEX后检测方案的最低要求

小分子适配体

小分子适配体筛选条件独具特性，其与靶标结合模式（多基团接触成笼状）异于蛋白靶标（形状互补主导）。表征环节应模拟筛选与应用场景，优先选用无损小分子靶标检测法（如 ITC、MST、荧光各向异性、FRET 等），规避固定化衍生问题。若采用化学固定法，应深度披露反应条件与基团选择依据，确保方法科学性与可靠性。关注创新型无固定化 SELEX 技术（如 GO-SELEX、Capture-SELEX）及规范，深度剖析pool与底物结合机制（时间、温度、缓冲条件），借严谨实验排除基质干扰，精准验证适配体与小分子靶标真实结合特性。

蛋白适配体

蛋白适配体研究多以重组蛋白为靶标，其生理态模拟至关重要，涵盖折叠构象与翻译后修饰考量。于生理相关条件（pH、温度、离子组成）下深度探测适配体结合特性，确保与实际应用场景契合。针对修饰蛋白，应运用先进技术（如细胞转染、蛋白pull down、Western blot 验证）确证适配体与靶蛋白型精准结合。结合特性测定应综合运用前沿技术（SPR、MST、ELISA、荧光读out 等），严格验证特异性并精准评估生物基质存在时的亲和力，借科学合理的对照样本（含蛋白成分对照与修饰状态对照）全方位勾勒蛋白适配体功能边界，为其临床与科研应用筑牢根基。

细胞适配体

细胞适配体开发需跨多细胞系验证，以亲和力与特异性双重指标评估靶向效率。综合运用多元技术（qPCR、流式细胞术、链霉亲和素-生物素检测法）协同评估，提升评估全面性与精准度。流式细胞术可精准量化适配体细胞结合水平、验证特异性，光学显微镜辅助解析适配体胞内命运轨迹（受体介导内吞或巨胞饮机制），图像采集分析盲法操作确保客观性。结果确认倚重阳性、阴性对照细胞系（含蛋白表达调控与多表达水平细胞系），强化结果可信度。若涉及受体介导内吞，应开展多维度实验（共定位、内吞抑制、细胞表面蛋白去除与适配体消化处理），深度剖析内吞机制细节，借无偏差图像采集（多视野覆盖）确保数据精准反映细胞整体响应，为细胞适配体功能诠释提供坚实证据链。

体外诊断适配体

体外诊断适配体研发初期聚焦模拟样本（含生物标志物的健康志愿者体液）评估，初步探底临床效用潜力。后续研究应拓展至临床样本验证，借充足病例与对照数据、ROC 曲线精析诊断敏感度与特异性，深度评估诊断效能。与现有抗体诊断技术（优选单克隆抗体）对比分析，凸显适配体诊断技术优势与特色，为临床应用转化注入强劲动力。

体内应用适配体

体内应用适配体设计聚焦SELEX优化与修饰策略创新，起始库核酸酶抗性提升可大幅削减后处理成本。筛选条件（生理温度、离子强度、含二价金属离子缓冲液）应紧密贴近生理环境，为体内应用奠基。体外特性经多法权威确证后开启体内评估征程，严守动物伦理 3R 原则精算动物数量、血清稳定性深度洞察、给药剂量依据充分夯实；依循实验设计前沿准则科学设置对照（含序列打乱对照、靶标缺失动物对照），敏锐捕捉适配体体内微观动态，检测法灵敏度全程重点关注，为体内应用适配体性能精准评估提供坚实保障，推动适配体技术从实验室迈向临床应用新征程。

研究结论与展望

MAPS 指南虽无法穷极适配体研究所有情境，但希望启发学界讨论，引领行业共识迈向新高度。推动适配体筛选、鉴定与应用全程遵循标准化规范的建立，显著提升研究重现性与质量，加速适配体技术临床转化与产业升级进程，为全球科研创新注入不竭动力，引领适配体技术在精准医疗、生物传感等多元领域开创新辉煌。各方应依检查表与建议表严谨处理稿件，推进行业规范化，助力适配体技术的广泛应用。