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链霉亲和素磁珠

链霉亲和素磁珠是将链霉亲和素(Streptavidin)通过共价键固定在磁性微球上,应用生物素与链霉亲和素之间的相互作用来实现生物素DNA或其他生物素标记的物质的固定化,DNA的大小会对被固定的效率有一定影响。该能力还取决于空间可用度以及微珠和DNA分子间及DNA分子相互之间的电荷作用。微珠表面的每个链霉亲和素分子对应 2 个或 3 个生物素结合位点。
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    核酸适配体筛选过程中链霉亲和素磁珠法制备ssDNA

    1. 将链霉亲和素磁珠颠倒或涡旋混合均匀,取出100μL去上清,使用400μL PBST清洗3遍后加入PCR产物1mL,往混合液中加入350μL4M NaCl,室温混匀旋转孵育15min
    2. 孵育结束后弃上清,使用400μL PBST 清洗磁珠4遍(此时双链PCR产物被固定在磁珠表面);
    3. 清洗结束后去上清,向磁珠中加入100μL 40mM NaOH,使用移液器混匀60秒,磁铁吸附磁珠,回收上清即可得到所需单链文库;
    4. 得到适配体文库加3.8μL1M HCl进行中和,然后再加入100μL2*筛选缓冲液后混匀,检测浓度后投入到下一轮筛选中。如对单链要求高,也可以将单链使用透析过夜;
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